酵母互補(bǔ)實(shí)驗(yàn)的快速檢測方法

 酵母，一種體內(nèi)模式生物，具有很大的優(yōu)勢(shì)。釀酒酵母，芽殖酵母，是一種單細(xì)胞真核生物。大多數(shù)進(jìn)程，例如轉(zhuǎn)錄，翻譯，蛋白質(zhì)折疊都是保守的，因此酵母是一種非常合適的復(fù)雜哺乳動(dòng)物細(xì)胞的替代品。

與其他模式生物不同，例如大腸桿菌，酵母沒有毒性，而且能表達(dá)完整的膜蛋白。

1996年對(duì)酵母基因組進(jìn)行測序后，出現(xiàn)了許多用于基因操作的工具。發(fā)明了例如穿梭載體，通過同源重組刪除基因。可以使用具有缺失菌株的大型文庫，輕松設(shè)置功能分析。

酵母互補(bǔ)試驗(yàn)，缺失某種蛋白質(zhì)的酵母突變體，通過轉(zhuǎn)基因?qū)⒁粋€(gè)外顯子基因質(zhì)粒轉(zhuǎn)入突變體。此時(shí)，這株酵母突變體面對(duì)一種境況，就是這種缺失掉的蛋白質(zhì)功能會(huì)影響它的存活和生長。如果這種缺失型突變體生長出來了，就意味著這種轉(zhuǎn)入的外顯子基因補(bǔ)償了這種缺失基因的功能，使得酵母細(xì)胞能夠正常存活和生長。有一些方法可以檢測酵母的互補(bǔ)試驗(yàn)，比如液體測量，尿素測量法，氨測量法，水份測量法等。在此，我們介紹一種方法：計(jì)數(shù)酵母的方法。

CellDrop 明場計(jì)數(shù)酵母細(xì)胞：采用*的小細(xì)胞模式，結(jié)合AI算法，準(zhǔn)確計(jì)算酵母細(xì)胞總數(shù)。

不僅如此，采用熒光染料FDA+PI的組合，可以進(jìn)行酵母細(xì)胞的活力檢測

 活性檢測：

     活性檢測即用兩種不同的熒光試劑進(jìn)行染色。Y20.1細(xì)胞，過夜誘導(dǎo)，在明場計(jì)數(shù)儀下計(jì)數(shù)5e6 cells/ml. 針對(duì)CellDrop 酵母活性分析（DeNovix）18ul的細(xì)胞懸浮液和1ul的FDA和PI?；旌衔锉芄庀?/span>15min。10ul的混合物側(cè)面peptide入到celldrop中，進(jìn)入yeast app進(jìn)行測量。

   活力檢測中，應(yīng)用熒光試劑判斷酵母細(xì)胞的死活，將檢測時(shí)間從5天的尿素檢測或氨檢測時(shí)間縮短到了十幾秒。

    無需一次性或可重復(fù)利用的計(jì)數(shù)板，CellDrop BF/FL做到絕對(duì)的無耗材，是新一代計(jì)數(shù)儀的代表。